[PCR]#11 결핵균(MTB) PCR 실험

박아름
2021-06-11
조회수 503


목차

1.개요 및 목적

2. 실험 재료 및 기기

3. 실험 방법 및 절차

4. 실험 결과

5. 주의 사항

6. 관련 자료


1. 개요 및 목적


1. 개요 및 목적

결핵균을 감지하는데 사용되는 중합효소 연쇄반응 분석법이다.

Mycobacterium tuberculosis(MTB) total genom의 Universal한 2부분의 Primer set을 사용하여 중합효소 연쇄반응을 일으켜 특정부분을 증폭함으로써 결핵의 증폭 여부를 확인한다.

2.실험 재료 및 기기

2. 실험 재료 및 기기

PCR PreMix, Primer set, 결핵균 DNA, Agaroge gel, TAE or TBE buffer, loading dye, DNA ladder (100bp)

  • Primer 정보
 Forward primer 1 CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG
 Reverse primer 1 CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG
 Forward primer 2 TCC GCT GCC AGT CGT CTT CC
 Reverse primer 2  GTC CTC GCG AGT CTA GGC CA


  • 실험 기기

Conventional PCR (ex.DuxCycler-바이오메듀스,한국)

DNA Electrophoresis (ex.DuxGeldoc- 바이오메듀스,한국)

3. 실험 방법 및 절차

3. 실험 방법 및 절차

1) PCR을 위한 반응 Tube의 조성은 다음과 같다. (검체 1개 기준)

첨가시약

Tube

Template DNA

3 ㎕

 PCR PreMix

10 ㎕

primer set

2 ㎕

D.W

5 ㎕

합계

20 ㎕

2) 위 premix, primer set, DW 를 test 할 개수+1 만큼 섞어서 PCR tube 에 17 ㎕ 씩 넣는다.

3) 위 튜브에 임상검체에서 추출한 template DNA 3 ㎕를 첨가한다.

(양성대조군, 음성대조군에는 Positive control DNA, Negative control DNA를 넣어준다.)

4) 각 혼합액 튜브는 30초간 spin down 후, PCR 장치에 넣어 아래와 같이 반응시킨다. 

과 정

온 도

시 간

cycle 수

Pre-Denaturation

94℃

5분

1

Denaturation

94℃

30초

40

Annealing/Extension

65℃

1분

Final-Extension

72℃

5분

1

End

4℃

 

 


4. 실험 결과

4. 실험 결과

5. 주의 사항

5. 주의 사항

1) 실험 도중 DNA나 PCR 시약이 오염되지 않도록 파이펫팅에 주의를 기울인다.

2) 실험 방법 중 온도나 시약 양을 틀리지 않게 주의하여 실험한다.


#결핵 #MTB #DNA # Universal primer #PCR







2 0