1. 개요 및 목적
1. 개요 및 목적
비브리오균은 대표적인 식중독의 원인균이고 또 장티푸스와 파라티푸스 등의 질병을 일으키는 병원균이다.
이 비브리오의 *유전자를 갖고 Real time PCR을 통해 이 병의 분자생물학적 검출 방법에 대해 알아볼 수 있다.
* 비브리오를 검출할 때 쓰는 주 타겟 유전자는 ToxR이라는 유전자이다. 이 유전자의 염기서열 내에서 프라이머와 프로브를 디자인한다.
2.실험 재료 및 기기
2. 실험 재료 및 기기
실험 재료
로슈 apta Taq DNA master mix, Vibrio Primer set (Forward, Reverse), Probe, Vibrio (ToxR) DNA, dH2O
ToxR_F: TGCTTCTGATAACAATGACGCCT
ToxR_R: ACTGGCGCTTCTGGTTCAAC
ToxR_P: AGCGACGCCTTCTGACGCAA-FAM
실험 기기
Real time PCR (ex.Quantstudio5-ThermoFisher)
3. 실험 방법 및 절차
3. 실험 방법 및 절차
① ToxR DNA를 10배씩 희석하여 준비한다.
| Sample 1 | Sample 2 | Sample 3 | Sample 4 | Sample 5 | Sample 6 |
|---|
| DNA | ToxR 2ul | Sample 1의
DNA 2ul | Sample 2의
DNA 2ul | Sample 3의
DNA 2ul | Sample 4의
DNA 2ul | Sample 5의
DNA 2ul |
| dH2O | 18ul | 18ul | 18ul | 18ul | 18ul | 18ul |
| Total | 20ul | 20ul | 20ul | 20ul | 20ul | 20ul |
② PCR 샘플 시약 조성
| Sample 1~6 | N.C. |
|---|
| Master Mix | 6ul | 6ul |
| Primer Set | 6ul | 6ul |
| ToxR DNA | 3ul | - |
| dH2O | 5ul | 8ul |
| Total | 20ul | 20ul |
③ PCR 조건에 맞춰 기기를 세팅한다.
| 단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
|---|
| UDG Incuvation | 50℃ | 02:00 | 1 |
| Denature | 95℃ | 00:30 | 40 |
| Anneal/Extend | 60℃ | 01:00 |
④ PCR이 끝난 후 그래프를 확인한다.
4. 실험 결과
4. 실험 결과
5. 주의 사항
5. 주의 사항
①형광이 붙은 probe를 사용하기 때문에 빛이 과하게 노출되지 않게 조심한다.
②DNA를 희석할 때 파이펫으로 정확한 양을 옮겨 희석할 수 있도록 주의한다.
③Sample의 각 조성을 모두 첨가 후 거품이 발생하지 않게 주의한다. 거품은 형광 신호 검출에 방해될 수 있다.
#Vibrio #ToxR #Quantstudio5
이경진 연구원
경기도 수원시 영통구 대학4로 17 (이의동) 에이스광교타워1 3층 308호
Tel.(+82)031-899-8620 Fax.(+82)031-899-8621
E-mail.biomedux@biomedux.com
목차
1.개요 및 목적
2. 실험 재료 및 기기
3. 실험 방법 및 절차
4. 실험 결과
5. 주의 사항
1. 개요 및 목적
1. 개요 및 목적
비브리오균은 대표적인 식중독의 원인균이고 또 장티푸스와 파라티푸스 등의 질병을 일으키는 병원균이다.
이 비브리오의 *유전자를 갖고 Real time PCR을 통해 이 병의 분자생물학적 검출 방법에 대해 알아볼 수 있다.
* 비브리오를 검출할 때 쓰는 주 타겟 유전자는 ToxR이라는 유전자이다. 이 유전자의 염기서열 내에서 프라이머와 프로브를 디자인한다.
2.실험 재료 및 기기
2. 실험 재료 및 기기
실험 재료
로슈 apta Taq DNA master mix, Vibrio Primer set (Forward, Reverse), Probe, Vibrio (ToxR) DNA, dH2O
ToxR_F: TGCTTCTGATAACAATGACGCCT
ToxR_R: ACTGGCGCTTCTGGTTCAAC
ToxR_P: AGCGACGCCTTCTGACGCAA-FAM
실험 기기
Real time PCR (ex.Quantstudio5-ThermoFisher)
3. 실험 방법 및 절차
3. 실험 방법 및 절차
① ToxR DNA를 10배씩 희석하여 준비한다.
DNA 2ul
DNA 2ul
DNA 2ul
DNA 2ul
DNA 2ul
② PCR 샘플 시약 조성
③ PCR 조건에 맞춰 기기를 세팅한다.
④ PCR이 끝난 후 그래프를 확인한다.
4. 실험 결과
4. 실험 결과
5. 주의 사항
5. 주의 사항
①형광이 붙은 probe를 사용하기 때문에 빛이 과하게 노출되지 않게 조심한다.
②DNA를 희석할 때 파이펫으로 정확한 양을 옮겨 희석할 수 있도록 주의한다.
③Sample의 각 조성을 모두 첨가 후 거품이 발생하지 않게 주의한다. 거품은 형광 신호 검출에 방해될 수 있다.
#Vibrio #ToxR #Quantstudio5
이경진 연구원
경기도 수원시 영통구 대학4로 17 (이의동) 에이스광교타워1 3층 308호
Tel.(+82)031-899-8620 Fax.(+82)031-899-8621
E-mail.biomedux@biomedux.com