1. 개요 및 목적
1. 개요 및 목적
임균(*Neisseria gonorrhoeae)은 전 실험의 Chlamydia trachomatis와 같이 대표적인 성병중에 하나인 임질을 일으키는 박테리아이다.
이 임균을 타겟으로 Real Time PCR을 진행해본다.
*Neisseria gonorrhoeae란? 두 개의 공모양을 하고 있는 쌍구균이다. 보통 성관계를 통해 전염되며 소변볼 때 따갑거나 진물이 나는 등의 증상을 보인다. 여성에게서는 무증상도 많으며 남성은 무증상이 거의 없다.
2.실험 재료 및 기기
2. 실험 재료 및 기기
실험 재료
TaqMan Gene expression master mix, Primer set (Forward, Reverse), Probe, Neisseria gonorrhoeae DNA, dH2O
F: CCTTTGGTCTTGGTTTCCAACA
R: TCATAGCGATATGGAGCGTCAA
P: CTCTGCTTCGGCTCT
실험 기기
Real Time PCR Systems (ex.QuantStudio5 - ABI, Thermo Fisher Scientific, USA)
3. 실험 방법 및 절차
3. 실험 방법 및 절차
① Neisseria gonorrhoeae DNA를 10배씩 희석하여 준비한다.
| Sample 1 | Sample 2 | Sample 3 | Sample 4 | Sample 5 |
|---|
DNA | 2uL | Sample 1의 DNA 2uL | Sample 2의 DNA 2uL | Sample 3의 DNA 2uL | Sample 4의 DNA 2uL |
dH2O | 18uL | 18uL | 18uL | 18uL | 18uL |
Total | 20uL | 20uL | 20uL | 20uL | 20uL |
② PCR 샘플 시약 조성
| Sample 1~5 | N.C. |
|---|
Master Mix | 10uL | 10uL |
Primer Set | 5uL | 5uL |
NG DNA | 3uL | - |
dH2O | 2uL | 5uL |
Total | 20uL | 20uL |
③ PCR 조건에 맞춰 기기를 세팅한다.
단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
|---|
UDG Incuvation | 50℃ | 02:00 | 1 |
Pre denature | 95℃ | 10:00 | 1 |
Denature | 95℃ | 00:15 | 40 |
Anneal/Extend | 60℃ | 01:00 |
④ PCR이 끝난 후 그래프를 확인한다.
4. 실험 결과
4. 실험 결과
5. 주의 사항
5. 주의 사항
① 형광이 붙은 probe를 사용하기 때문에 빛이 과하게 노출되지 않게 조심한다.
② DNA를 희석할 때 파이펫으로 정확한 양을 옮겨 희석할 수 있도록 주의한다.
③ Sample의 각 조성을 모두 첨가 후 거품이 발생하지 않게 주의한다. 거품은 형광 신호 검출에 방해될 수 있다.
6. 관련 자료
#Neisseria gonorrhoeae #Real Time PCR #Quantitative PCR
이경진 연구원
경기도 수원시 영통구 대학4로 17 (이의동) 에이스광교타워1 3층 308호
Tel.(+82)031-899-8620 Fax.(+82)031-899-8621
E-mail. biomedux@biomedux.com
목차
1.개요 및 목적
2. 실험 재료 및 기기
3. 실험 방법 및 절차
4. 실험 결과
5. 주의 사항
1. 개요 및 목적
1. 개요 및 목적
임균(*Neisseria gonorrhoeae)은 전 실험의 Chlamydia trachomatis와 같이 대표적인 성병중에 하나인 임질을 일으키는 박테리아이다.
이 임균을 타겟으로 Real Time PCR을 진행해본다.
*Neisseria gonorrhoeae란? 두 개의 공모양을 하고 있는 쌍구균이다. 보통 성관계를 통해 전염되며 소변볼 때 따갑거나 진물이 나는 등의 증상을 보인다. 여성에게서는 무증상도 많으며 남성은 무증상이 거의 없다.
2.실험 재료 및 기기
2. 실험 재료 및 기기
실험 재료
TaqMan Gene expression master mix, Primer set (Forward, Reverse), Probe, Neisseria gonorrhoeae DNA, dH2O
F: CCTTTGGTCTTGGTTTCCAACA
R: TCATAGCGATATGGAGCGTCAA
P: CTCTGCTTCGGCTCT
실험 기기
Real Time PCR Systems (ex.QuantStudio5 - ABI, Thermo Fisher Scientific, USA)
3. 실험 방법 및 절차
3. 실험 방법 및 절차
① Neisseria gonorrhoeae DNA를 10배씩 희석하여 준비한다.
② PCR 샘플 시약 조성
③ PCR 조건에 맞춰 기기를 세팅한다.
④ PCR이 끝난 후 그래프를 확인한다.
4. 실험 결과
4. 실험 결과
5. 주의 사항
5. 주의 사항
① 형광이 붙은 probe를 사용하기 때문에 빛이 과하게 노출되지 않게 조심한다.
② DNA를 희석할 때 파이펫으로 정확한 양을 옮겨 희석할 수 있도록 주의한다.
③ Sample의 각 조성을 모두 첨가 후 거품이 발생하지 않게 주의한다. 거품은 형광 신호 검출에 방해될 수 있다.
6. 관련 자료
#Neisseria gonorrhoeae #Real Time PCR #Quantitative PCR
이경진 연구원
경기도 수원시 영통구 대학4로 17 (이의동) 에이스광교타워1 3층 308호
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