1. 개요 및 목적
1. 개요 및 목적
살모넬라균은 대표적인 식중독의 원인균이고 또 장티푸스와 파라티푸스 등의 질병을 일으키는 병원균이다.
이 살모넬라의 *유전자를 갖고 Real time PCR을 통해 이 병의 분자생물학적 검출 방법에 대해 알아볼 수 있다.
*살모넬라를 검출할 때 쓰는 주 타겟 유전자는 invA라는 유전자이다. 이 유전자의 염기서열 내에서 프라이머와 프로브를 디자인한다.
2.실험 재료 및 기기
2. 실험 재료 및 기기
실험 재료
로슈 apta Taq DNA master mix, Salmonella Primer set (Forward, Reverse), Probe, Salmonella (invA) DNA, dH2O
invA_F: GAATCCTCAGTTTTTCAACGTTTC
invA_R: CGAATTGCCCGAACGTGGCGA
invA_P: CGTCTGGCATTATCGATCAG-FAM
실험 기기
Real time PCR (ex.CFX96-BioRad)
3. 실험 방법 및 절차
3. 실험 방법 및 절차
① invA DNA를 10배씩 희석하여 준비한다.
| Sample 1 | Sample 2
| Sample 3
| Sample 4 | Sample 5
| Sample 6
|
|---|
| DNA | invA 2ul | Sample 1의 DNA 2ul | Sample 2의 DNA 2ul
| Sample 3의 DNA 2ul
| Sample 4의 DNA 2ul
| Sample 5의 DNA 2ul
|
dH2O
| 18ul | 18ul
| 18ul
| 18ul
| 18ul
| 18ul
|
| Total | 20ul | 20ul
| 20ul
| 20ul
| 20ul | 20ul
|
② PCR 샘플 시약 조성
| Sample 1 ~ 6 | N.C. |
|---|
| Master Mix | 10ul | 10ul |
| Primer Set | 3ul | 3ul |
| invA DNA | 5ul | - |
dH2O
| 2ul | 7ul |
| Total | 20ul | 20ul |
③PCR 조건에 맞춰 기기를 세팅한다.
| 단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
|---|
| UDG Incuvation | 50℃ | 02:00 | 1 |
| Pre denature | 95℃
| 10:00 | 1 |
| Denature | 95℃
| 00:15 | 40 |
| Anneal/Extend | 60℃
| 01:00 |
④PCR이 끝난 후 그래프를 확인한다.
4. 실험 결과
4. 실험 결과
5. 주의 사항
5. 주의 사항
①형광이 붙은 probe를 사용하기 때문에 빛이 과하게 노출되지 않게 조심한다.
②DNA를 희석할 때 파이펫으로 정확한 양을 옮겨 희석할 수 있도록 주의한다.
③Sample의 각 조성을 모두 첨가 후 거품이 발생하지 않게 주의한다. 거품은 형광 신호 검출에 방해될 수 있다.
#Salmonella #invA ＃CFX96
이경진 연구원
경기도 수원시 영통구 대학4로 17 (이의동) 에이스광교타워1 3층 308호
Tel.(+82)031-899-8620 Fax.(+82)031-899-8621
E-mail.biomedux@biomedux.com
목차
1.개요 및 목적
2. 실험 재료 및 기기
3. 실험 방법 및 절차
4. 실험 결과
5. 주의 사항
1. 개요 및 목적
1. 개요 및 목적
살모넬라균은 대표적인 식중독의 원인균이고 또 장티푸스와 파라티푸스 등의 질병을 일으키는 병원균이다.
이 살모넬라의 *유전자를 갖고 Real time PCR을 통해 이 병의 분자생물학적 검출 방법에 대해 알아볼 수 있다.
*살모넬라를 검출할 때 쓰는 주 타겟 유전자는 invA라는 유전자이다. 이 유전자의 염기서열 내에서 프라이머와 프로브를 디자인한다.
2.실험 재료 및 기기
2. 실험 재료 및 기기
실험 재료
로슈 apta Taq DNA master mix, Salmonella Primer set (Forward, Reverse), Probe, Salmonella (invA) DNA, dH2O
invA_F: GAATCCTCAGTTTTTCAACGTTTC
invA_R: CGAATTGCCCGAACGTGGCGA
invA_P: CGTCTGGCATTATCGATCAG-FAM
실험 기기
Real time PCR (ex.CFX96-BioRad)
3. 실험 방법 및 절차
3. 실험 방법 및 절차
① invA DNA를 10배씩 희석하여 준비한다.
② PCR 샘플 시약 조성
③PCR 조건에 맞춰 기기를 세팅한다.
④PCR이 끝난 후 그래프를 확인한다.
4. 실험 결과
4. 실험 결과
5. 주의 사항
5. 주의 사항
①형광이 붙은 probe를 사용하기 때문에 빛이 과하게 노출되지 않게 조심한다.
②DNA를 희석할 때 파이펫으로 정확한 양을 옮겨 희석할 수 있도록 주의한다.
③Sample의 각 조성을 모두 첨가 후 거품이 발생하지 않게 주의한다. 거품은 형광 신호 검출에 방해될 수 있다.
#Salmonella #invA ＃CFX96
이경진 연구원
경기도 수원시 영통구 대학4로 17 (이의동) 에이스광교타워1 3층 308호
Tel.(+82)031-899-8620 Fax.(+82)031-899-8621
E-mail.biomedux@biomedux.com