[PCR]아가로스 겔(agarose gel) 만들기

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1. 개요 및 목적

(내용시작!)

전기영동(electrophoresis)을 할 때 필요한 겔(gel)을 만드는 과정이다.

2. 실험 재료 및 기기

2. 실험 재료 및 기기

아가로스 파우더, well comb, 10X TBE buffer, 0.5X TBE buffer, 삼각플라스크, 눈금실린더, 트레이, 전자저울, 유산지, 시약스푼, 전자저울

3. 실험 방법 및 절차

3. 실험 방법 및 절차

① 10X TBE buffer를 0.5X로 희석하여 준비한다.

Note: 1000ml의 0.5X를 만들 경우, 증류수 950ml 와 10X TBE buffer 50ml을 희석하여 만든다.

② agarose gel은 DNA의 종류에 따라서 농도를 다르게 하기 때문에 주어진 부피에서 아가로스 질량을 조절하여 다른 농도의 겔을 만들어 사용한다. 

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예시 ④번일 경우, 아가로스 파우더를 3g을 전자저울로 계량 후 삼각플라스크에 조심히 옮겨 담는다.

③ 0.5X TBE buffer 150 ml을 눈금실린더로 계량 후 아가로스 파우더가 담겨있는 삼각플라스크를 벽면을 따라 부어준다.(삼각플라스크 벽면에 묻은 가루를 씻어내기 위함)

④ 삼각플라스크를 살짝 흔들어서 믹싱 해준다음 전자레인지에 2~3분간 돌려 아가로스 파우더를 완전히 녹여준다.

⑤ 겔이 녹는동안 트레이를 만들어 준다. 큰 틀에 작은 틀을 끼워 만든다.

⑥  잘 녹은 아가로스 겔 용액을 충분히 식힌 후 트레이에 부어준다(플라스크 바닥을 수돗물로 씻어내면 더욱 빠르게 식힐 수 있다). 기포가 생기지 않게 천천히 부어준다. 부은 후 기포가 생겼을 경우에 피펫 팁을 이용하여 기포를 없애준다. 오븐장갑 사용!!!

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⑦ well comb을 첫 번째와 세 번째틈에 끼운다.

⑧ 겔이 완전히 굳을 때까지 30~40분간 놓아 둔다.

4. 실험 결과

4. 실험 결과

완전히 굳었는지 확인 한 후 well comb을 조심히 빼고 전기영동에 사용한다.

바로 사용하지 않는 경우 마르지 않게 0.5X TBE buffer에 보관한다.

5. 주의 사항

5. 주의 사항

- 계량 할 때, 적확한 양을 넣을 수 있게 주의한다.

- 전자레인지 사용 시 꼭 오븐장갑을 끼고 삼각플라스크를 만진다.

- well comb제거 시 겔이 부서지지 않도록 조심한다.

(내용시작!)

김민지

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